我國(guó)土壤類型多樣,地理分異特征明顯。大空間尺度上環(huán)境條件變化如何影響小尺度下的土壤微生物群落結(jié)構(gòu)與功能的演化,即是科學(xué)前沿,也是研究難點(diǎn)。例如,最近西班牙研究人員發(fā)現(xiàn)在海洋環(huán)境中,由于NH3極度匱乏,導(dǎo)致氨氧化古菌長(zhǎng)期適應(yīng)底物脅迫逆境,發(fā)展了尿素水解為基礎(chǔ)的古菌氨氧化代謝途徑(Alonso-Sáez et al. 2012. PNAS. 109: 17989),這一新的古菌微進(jìn)化機(jī)制被PNAS同期論文點(diǎn)評(píng)(Kirchman 2012 PNAS. 109: 17732)。與大部分海洋環(huán)境類似,酸性土壤中NH3濃度極度匱乏,僅在nM水平。地球陸地表層30%左右的土壤偏酸性,而我國(guó)pH在4.5-5.5之間的鐵鋁酸性土壤約占全國(guó)土地總面積22.7%,但古菌如何適應(yīng)酸性土壤的底物脅迫,是否具有尿素水解為基礎(chǔ)的氨氧化代謝路徑,目前仍不清楚。2012年,賈仲君課題組聯(lián)合中國(guó)農(nóng)科院茶葉研究所,采用高度靈敏的15N示蹤和高通量測(cè)序技術(shù),證實(shí)復(fù)雜的自然土壤環(huán)境中存在尿素水解為基礎(chǔ)的古菌氨氧化過(guò)程。研究結(jié)果被國(guó)際微生物生態(tài)雜志刊發(fā)(Lu et al. 2012. ISMEJ 6: 1978),然而,復(fù)雜環(huán)境中,古菌脲酶作用機(jī)制仍不清楚,復(fù)雜環(huán)境中活性的氨氧化古菌是否具有脲酶基因,仍未見(jiàn)報(bào)道。
最近,中科院南京土壤研究所賈仲君課題組利用穩(wěn)定性同位素13C-示蹤酸性土壤氨氧化古菌核酸DNA,揭示了復(fù)雜土壤中活性氨氧化古菌的系統(tǒng)發(fā)育地位,進(jìn)一步利用高通量測(cè)序技術(shù),發(fā)現(xiàn)活性氨氧化古菌含有脲酶基因,表明氨氧化古菌具有脲酶水解的遺傳基礎(chǔ)。采用13CO2和尿素培養(yǎng)兩種酸性土壤8周后,酸性古菌在土壤中大量生長(zhǎng),其核酸DNA被13C-標(biāo)記,通過(guò)超高速等密度梯度離心獲得氨氧化古菌的13C-DNA,結(jié)合新一代高通量測(cè)序等技術(shù),在多基因水平清楚揭示了古菌主導(dǎo)酸性土壤氨氧化的生態(tài)過(guò)程,并可能在NH3長(zhǎng)期脅迫條件下進(jìn)化出了脲酶水解基因。進(jìn)一步的乙炔生理抑制實(shí)驗(yàn)表明:土壤古菌生長(zhǎng)所需的能量完全依賴于氨氧化,清楚揭示了復(fù)雜土壤環(huán)境中古菌化能無(wú)機(jī)自養(yǎng)代謝類型。研究結(jié)果最近被《環(huán)境微生物》雜志(Environmental Microbiology.)在線刊發(fā)。
據(jù)估算,全球每年大約1億噸氮肥進(jìn)入農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng),約占全球氮輸入量的25%強(qiáng)。我國(guó)氮肥年施用量高達(dá)2600萬(wàn)噸,其中絕大部分氮肥以尿素形式進(jìn)入土壤。該研究成果拓展了復(fù)雜酸性土壤環(huán)境中古菌的代謝多樣性,初步揭示了氨氧化古菌適應(yīng)底物脅迫環(huán)境的微進(jìn)化機(jī)制,為未來(lái)準(zhǔn)確評(píng)估酸性土壤氮循環(huán)及其農(nóng)業(yè)與環(huán)境效應(yīng)提供了科學(xué)依據(jù)。目前,國(guó)際NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中氨氧化古菌脲酶基因絕大部分來(lái)自該課題組的實(shí)驗(yàn)。
