4月17日，國際學(xué)術(shù)期刊Journal of Virology 在線發(fā)表了中國科學(xué)院上海巴斯德研究所藍(lán)柯組的研究論文Kaposi's Sarcoma-Associated Herpesvirus-Encoded LANA Interacts with Host KAP1 to Facilitate Establishment of Viral Latency（《卡波氏肉瘤相關(guān)皰疹病毒潛伏態(tài)核抗原與宿主KAP1分子相互作用促進(jìn)病毒潛伏感染的建立》）。
卡波氏肉瘤病毒（KSHV）是一種致瘤性皰疹病毒，具有皰疹病毒的典型特征：存在潛伏感染和裂解性復(fù)制兩種不同的生命周期。在宿主原發(fā)感染KSHV后，KSHV能很快地（一般在24-48小時內(nèi)）在宿主體內(nèi)建立潛伏感染并伴隨宿主終生。在宿主體內(nèi)，KSHV建立潛伏感染是其致病的必要條件，并在其生命周期中占據(jù)主導(dǎo)地位。因此，揭示KSHV在感染宿主細(xì)胞后迅速建立潛伏感染的機制將為探索相關(guān)疾病有效防治手段提供線索。
在KSHV感染早期階段，裂解期基因會有一個短期的表達(dá)過程并隨即沉默。前期研究發(fā)現(xiàn)KSHV編碼的潛伏態(tài)核抗原（LANA）對調(diào)控病毒潛伏感染的建立和維持起關(guān)鍵作用，缺失LANA的KSHV會導(dǎo)致病毒基因組的丟失并促進(jìn)裂解期基因的表達(dá)。此外，LANA蛋白能通過抑制病毒激活開關(guān)分子RTA啟動子的活性下調(diào)其表達(dá)，但具體機制未完全闡明。
研究人員通過串聯(lián)親和層析技術(shù)，發(fā)現(xiàn)了與LANA相互作用的新的宿主轉(zhuǎn)錄抑制蛋白KAP1，KAP1可以通過招募組蛋白去乙�；负图谆D(zhuǎn)移酶復(fù)合物改變表觀遺傳狀態(tài)。通過免疫共沉淀、體外結(jié)合和免疫熒光實驗，研究證實了LANA和KAP1的直接相互作用以及細(xì)胞核內(nèi)的共定位，并測定出LANA與KAP1的N端、C端同時結(jié)合；通過染色質(zhì)免疫共沉淀和熒光素酶報告基因?qū)嶒�，進(jìn)一步證實了LANA可以將KAP1招募到KSHV RTA啟動子區(qū)域并抑制RTA的表達(dá)。為了探究LANA是否會招募KAP1到KSHV基因組其它區(qū)域，研究人員通過染色質(zhì)免疫共沉淀-深度測序技術(shù)(ChIP-seq)，證實了LANA和KAP1在KSHV基因組上有多個共結(jié)合位點。在KSHV從頭感染實驗中，LANA招募的KAP1被證明對KSHV感染的早期階段裂解期基因表達(dá)的關(guān)閉起到重要作用。此項研究揭示了在KSHV感染早期階段LANA對裂解期基因轉(zhuǎn)錄抑制的機制，為了解KSHV潛伏感染的建立過程提供了新線索。
此項研究在中科院馬普計算生物學(xué)研究所Omics Core的技術(shù)支持和研究員藍(lán)柯的指導(dǎo)下，由博士研究生孫銳和研究組其他成員共同完成，并獲得了國家自然科學(xué)基金重點項目及國家“973”計劃等項目的經(jīng)費支持。
LANA和KAP1在KSHV基因組上有多個共結(jié)合位點。 A）根據(jù)人基因組比對結(jié)果用MACS得到的LANA和KAP1的Peak模型。B) LANA和KAP1在KSHV基因組上結(jié)合位點的圖示。C) LANA和KAP1共結(jié)合區(qū)域的圖示。D) ChIP-qPCR驗證ChIP-seq得到的結(jié)果。E) PCR驗證BC3細(xì)胞中KSHV基因組可能的缺失或變異。
