5月7日，中國科學院上海巴斯德研究所腫瘤病毒課題組的研究論文Recombinant Covalently Closed Circular Hepatitis B Virus DNA Induces Prolonged Viral Persistence in Immunocompetent Mice（《重組乙肝病毒cccDNA在免疫健全的小鼠中誘導延長的病毒持續(xù)性感染》）在Journal of Virology 上在線發(fā)表。
我國是乙肝病毒（HBV）感染高發(fā)國家，目前有9000多萬慢性感染者，嚴重影響了人類健康。共價閉合環(huán)狀DNA（cccDNA）是HBV慢性感染的分子基礎，但現(xiàn)有的抗病毒藥物難以清除cccDNA，導致慢性乙型肝炎難以徹底治愈。由于HBV易感宿主僅限于人和黑猩猩等靈長類動物，且具有顯著的嗜肝性特征，因此研究HBV病毒學和免疫學缺乏合適的實驗動物模型。小鼠是理想的模式實驗動物，但是不能被HBV感染。此外，盡管支持HBV細胞內(nèi)復制和病毒粒子的釋放，小鼠的肝臟細胞中并不能形成cccDNA。因此，建立基于cccDNA的HBV持續(xù)感染小鼠模型具有重要的科學意義。
研究人員將一段含有重組位點的外源內(nèi)含子序列插入單拷貝的HBV基因組中，構(gòu)建出cccDNA前體質(zhì)粒（prcccDNA）。prcccDNA在重組酶Cre表達的情況下，在肝細胞中誘導HBV重組cccDNA（rcccDNA）產(chǎn)生。rcccDNA以微染色體的形式存在。通過尾靜脈高壓注射小鼠的方式，rcccDNA可在小鼠的肝臟細胞中迅速積累，并誘導完整、有效的細胞內(nèi)病毒復制。研究表明小鼠體內(nèi)的T細胞免疫反應被特異性激活但并不完全。研究人員進一步減少DNA注射劑量后，免疫系統(tǒng)則呈現(xiàn)出不應答狀態(tài)，從而導致了一個顯著延長的HBV血清學表現(xiàn)（9周），同時伴隨肝臟持續(xù)性炎癥損傷。此項研究首次在免疫健全的小鼠上建立了基于cccDNA的HBV持續(xù)感染，為HBV慢性病理機制和抗病毒治療研究提供了重要的實驗動物模型。
此項工作在藍柯研究員、鄧強副研究員的指導下，由博士研究生齊治華、李改云和課題組其他成員共同完成，得到國家自然科學基金、國家科技重大專項以及“973”計劃等項目的支持。
A-C:重組誘導外源內(nèi)含子的剪切，但不影響HBV讀碼框的轉(zhuǎn)錄和翻譯；D: 在重組酶Cre的誘導下，單拷貝的HBV rcccDNA的產(chǎn)生。
