標題:人類免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗體免疫印跡試劑盒
【生產(chǎn)廠家】杭州澳亞生物技術(shù)有限公司
【批準文號】國藥準字S20010010
【劑 型】試劑盒
【規(guī) 格】20人份
【醫(yī)保類型】
【國家基本藥物】否
【英文名】HIV 1/2 Antibody Immunoblot Kit
【漢語拼音】Renleimianyiquexianbingdu 1+2 xing Kangtimianyi Yinji Shijihe
【主要成分】本試劑盒組成：
1 HIV1/2抗原硝酸纖維膜條 20條（塑料管裝）
2 印跡緩沖液（10×） 12ml（塑料瓶裝）
3 漂洗緩沖液（10×） 60ml（塑料瓶裝）
4 底物BCIP／NBT溶液 50ml（塑料瓶裝）
5 結(jié)合物 70μl （離心管裝）
6 印跡粉 1g×8 （袋裝）
7 HIV 1/2陰性對照血清 70μl （離心管裝）
8 HIV-1弱陽性對照血清 70μl （離心管裝)
9 HIV-1強陽性對照血清 70μl （離心管裝）
10 反應槽 2塊 （袋裝）
【試劑盒名稱】
人類免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗體免疫印跡試劑盒
【原理】
以硝酸纖維素膜為載體的抗原條，組合了HIV-1全病毒抗原和HIV-2 gp36重組蛋白抗原。當抗原條與被檢血清及對照血清接觸時，如血清標本有HIV-1/HIV-2特異性抗體，將會與抗原條上的HIV-1/HIV-2 gp36抗原結(jié)合。結(jié)合的抗體再與結(jié)合物（羊抗人IgG標記堿性磷酸酶）結(jié)合，加入底物（BCIP/NBT）顯色，觀察結(jié)果來判斷。
【適應范圍】
用于在初篩試劑判斷為HIV陽性(如ELISA法)基礎上的血清或血漿樣本，進行確證是否為HIV-1陽性及診斷是否感染了HIV-2。
【使用方法】
1.試驗室必備器材
1.1 搖床：
速度為15-18轉(zhuǎn)／分鐘
1.2 移液管
1.3 貯水瓶
1.4 電動吸引器
1.5 鑷子或鉗子
2.溶液的配制（請按需要量現(xiàn)配現(xiàn)用）
2.1 漂洗緩沖液配制
取適量漂洗緩沖液（10倍），用蒸餾水按1：10稀釋，混勻待用。試驗所需數(shù)量參考下表配制。
2.2 印跡緩沖液配制
a. 取適量印跡緩沖液(10倍),用蒸餾水按1:10稀釋;
b. 1g印跡粉加入20ml印跡緩沖液中充分溶解待用。試驗所需數(shù)量參考下表配制。
2.3 結(jié)合物稀釋液
現(xiàn)用現(xiàn)配，按2μl結(jié)合物加2ml印跡緩沖液的比例配制，并混勻待用。
不同抗原條數(shù)量所需的各種試劑量
抗原條數(shù)量 4 6 8 12 16 20
試劑 所需試劑量
1×漂洗液（ml） 60 120 160 200 280 320
1×印跡液（ml） 20 40 40 60 80 100
印跡粉（g）1 2 2 345
結(jié)合物（μl） 10 14 18 26 34 42
底物（ml） 8 12 16 24 32 40
3 操作程序
3.1 取出反應槽，每一槽內(nèi)加2ml漂洗緩沖液。
3.2 用鑷子小心地夾住抗原條編號的一端放入已加有漂洗緩沖液的反應槽中，有編號的一面朝上，每槽1條，讓溶液覆蓋住抗原條。
3.3 將反應槽放在搖床上，旋搖5-10分鐘，然后吸棄漂洗緩沖液。
3.4 每槽加入印跡緩沖液2ml。
3.5 用微量移液器在每一槽中分別加入20μl待檢血清或血漿（注意：凡溶血、脂血或混濁樣品均不能獲得可靠結(jié)果），并用本試劑盒中的對照血清作平行對照。每槽加一個樣品，每加一個樣品，換一個吸頭，以免造成交叉污染。
3.6 在室溫下將反應槽在搖床上旋搖60分鐘，注意控制旋搖速度，以免溶液從槽內(nèi)濺入鄰近槽中，造成試驗結(jié)果誤差。
3.7 旋搖完畢后，吸棄印跡緩沖液（注：廢棄液應放入預先加入1％次氯酸鈉溶液的貯水瓶中。）
3.8 每槽加入2ml漂洗緩沖液，旋搖5分鐘后，吸棄漂洗緩沖液，共漂洗3次，每次5分鐘。
3.9 在每槽中加入2ml結(jié)合物稀釋液，旋搖45分鐘。
3.10 從槽中吸棄結(jié)合物稀釋液，每槽用2ml漂洗液漂洗三次，每次5分鐘，吸盡余液。
3.11 每槽中加入底物2ml，旋搖15分鐘。（注意時間太長抗原條本底變深，會使結(jié)果判斷困難；如果強陽性血清色帶增深時可先行終止反應；若弱陽性對照血清色帶較淺，可以適當延長反應時間，但不得超過30分鐘。）
3.12 吸去底物液，每槽中加入2ml蒸餾水，旋搖5分鐘后，終止反應。
3.13 將抗原條放于二張濾紙間吸干水份后觀察結(jié)果。
4 結(jié)果判斷
4.1 對照血清檢測結(jié)果判定要求
4.1.1 HIV-1強陽性對照血清必需出現(xiàn)gp160/gp120和gp41、p24帶型，以及p66、p55/p51、p34、p17帶型判定為陽性，HIV-2 gp36為陰性（見模式圖）。
4.1.2 HIV-1弱陽性對照血清，在gp160、gp120和gp41、p24帶型中至少出現(xiàn)二條，判定為陽性。其它位置其可能出現(xiàn)弱帶，但對分析并非必需。HIV-2 gp36為陰性。
4.1.3 HIV-2陽性對照血清必需出現(xiàn)gp36重組蛋白帶型，判定為陽性。
4.1.4 陰性對照血清應無上述的特異性帶型出現(xiàn)，判定為陰性。
4.2 被檢血清/血漿的判定標準
4.2.1 有下列情況之一者判定為HIV-1抗體陽性。
（1）至少一條env帶和一條pol帶；
（2）至少一條env帶和一條gag帶；
（3）至少一條env帶、一條gag帶和一條pol帶；
（4）至少二條env帶；
（注：env帶有g(shù)p160、gp120、gp41；gag帶有p55、p24、p17；pol帶有p66、p51、p34。）
4.2.2 有HIV-2 gp36重組蛋白帶型出現(xiàn)者判定為HIV-2抗體陽性，需用HIV－2確認試劑進一步檢測。
4.2.3 無HIV抗體特異性帶型出現(xiàn)者判定為HIV抗體陰性。
4.2.4 出現(xiàn)HIV特異性抗體帶型，但帶型不足以確認陽性者，判定為HIV抗體可疑。
5 注意事項
5.1 只有按此手冊的操作程序操作才能獲得可信的結(jié)果，任何不按規(guī)程操作均可能造成錯誤的結(jié)論。不論待測樣品多少，HIV-1強陽性、HIV-1弱陽性和HIV-1+2陰性血清對照均必須同時進行。
5.2 所有操作均應在室溫下進行。試劑盒在檢測前從冰箱中取出，放于室溫下，平衡30分鐘后，方可使用。
5.3 任何變質(zhì)的抗原條，如變色或出現(xiàn)霉斑，不得使用。漂洗緩沖液和印跡液呈現(xiàn)云狀物或白色顆粒，仍可使用，不能過濾。除底物以外，任何試劑變成黃色均表示試劑的變質(zhì)。底物如變成蘭色，也意味著變質(zhì)。任何變質(zhì)的抗原條或試劑都可能產(chǎn)生錯誤的結(jié)果。
5.4 整個操作過程均應戴手套，穿工作服，操作結(jié)束后及時洗手，配制溶液時嚴禁用嘴吸吸管。
5.5 所有待檢樣品，硝酸纖維膜抗原條和對照血清均應作為可傳染的病原體處理。
5.6 試驗中有液體濺出時，及時用1％次氯酸鈉處理，污染了的材料均應消毒處理。
HIV-1+2抗原條模式圖
人類免疫缺陷病毒(HIV)1+2
強陽性對照的特異性結(jié)構(gòu)蛋白帶型
5.7 試驗中所用到的樣品和材料均應作為可傳染物處理。可用121℃高壓滅菌1小時，也可焚燒處理，液體廢物可用1％次氯酸鈉處理。
5.8 使用時，本試劑盒中提供的對照血清及試劑不可與另一套試劑盒混用，也不要交換瓶蓋，否則會造成交叉污染。
5.9 如果一次測試樣品不足20條，剩余抗原條仍放回原抗原條管中，密封好后于2-8℃保存。
5.10 如果抗原條和血清樣品作用時間過長，陰性樣品也可能出現(xiàn)弱帶。
5.11 HIV-1陽性血清，據(jù)資料介紹，有少數(shù)病例可與HIV-2 gp36呈交叉反應。
5.12 本試劑盒開啟后，盡可能在1個月內(nèi)使用完畢。
【規(guī)格】
20人份/盒
【有效期】
自檢定合格之日起有效期為7個月。
【貯藏】
密閉避光，保存于2-8℃的冷藏柜中。
【批準文號】
國藥準字S20010010