游離甲狀腺素(FT4)定量檢測試劑盒(磁分離酶聯(lián)免疫法)【生產(chǎn)廠家】北京倍愛康生物技術(shù)有限公司 【批準文號】國藥準字S20050073 【劑 型】檢測試劑盒 【規(guī) 格】200管份 【醫(yī)保類型】 【國家基本藥物】否 【品名】 游離甲狀腺素(FT4)定量檢測試劑盒（磁分離酶聯(lián)免疫法） 【用途】 本品是為定量測定人血清或血漿中游離甲狀腺素(FT4)而設(shè)計的。 本方法適用樣品濃度范圍為0.1-120pg/ml(0.129-154.4pmol/l)。 【概述和說明】 甲狀腺素或3，5，3"，5"—四碘甲腺原氨酸是一種甲狀腺激素，分子量777，在甲狀腺中由與一種特殊蛋白質(zhì)甲狀腺球蛋白結(jié)合的酪氨酸碘化合成[1]。T4作為甲狀腺球蛋白分子的一部份，貯存在甲狀腺的濾泡里。當需要T4時，甲狀腺球蛋白水解，把T4釋放進血液中[2]。 T4以二種形式(結(jié)合型和游離型)存在于血清中，且兩者保持著動態(tài)平衡。其中99%以上的T4與血清結(jié)合蛋白結(jié)合，主要是甲狀腺素結(jié)合球蛋白(TBG)，少量與甲狀腺素結(jié)合前白蛋白(TBPA)和白蛋白結(jié)合[3]。然而只有占少部分的那些游離型T4(約占總T4的0.03%)才被認為是有生理活性的，因為只有它才能進入靶細胞[3,4]。T4一旦進入細胞，就影響蛋白質(zhì)、脂類、碳水化合物的代謝和能量的產(chǎn)生。T4在外周組織里還作為一種激素原起作用，在那里被進一步代謝成更有活性的甲狀腺激素－三碘甲狀腺氨酸(T3)和無活性的代謝產(chǎn)物如反T3[5]。 總T4的濃度會隨TBG濃度的變化而變化，而后者會因某些非甲狀腺因素引起變化。如妊娠期、肝炎、先天性TBG含量高，服用雌激素(口服避孕藥)時[6]，TBG濃度增加，總T4濃度也升高，相反在腎病、肝衰竭、先天性TBG不足、服用雄激素或大劑量糖皮質(zhì)激素治療等情況下，TBG濃度會降低，則總T4水平也降低[7]。盡管由于上述情況使總T4的水平發(fā)生了變化，但不會影響到甲狀腺的功能，因為機體會進行調(diào)節(jié)使游離T4水平保持不變[3,4]。因此，在臨床上，甲狀腺機能正常的患者不會受TBG濃度變化的影響仍保持正常的甲狀腺機能。 在實驗室評價甲狀腺的功能狀態(tài)方面，對FT4的測定無論是理論上還是實際中都要優(yōu)于總T4的測定。這些優(yōu)勢是基于前面提及的二個因素。第一：認識到FT4是代謝活性形式，使FT4的測定在理論上更優(yōu)于總T4的測定，因為它能更直接地評價甲狀腺的功能。第二：總T4水平隨著TBG濃度的變化而變化，而FT4的水平卻能保持不變。因此FT4水平測定，能更正確地反映甲狀腺的實際功能狀態(tài)。 【原理】 本方法為酶聯(lián)免疫系統(tǒng)與磁性微粒分離技術(shù)相結(jié)合的一種測定法，并使用了一種高親合力的抗體。 標本，質(zhì)控品和標準品中的FT4 (A)與限量的酶標T4同定量熒光素標T4單克隆抗體競爭結(jié)合(B、C)。 與抗體結(jié)合的酶標T4的量與標本中FT4的含量成反比。堿性磷酸酶標T4連接物不會和TBG或其他結(jié)合蛋白結(jié)合，因此在孵育的短時間內(nèi)不會影響游離T4與結(jié)合T4的平衡。 37℃孵育15分鐘后，加入過量的與磁性微粒結(jié)合的羊抗熒光素抗體。它快速特異地結(jié)合熒光素標T4單克隆抗體形成復合物(D)。不需離心，在磁場中沉淀(E)。 倒去上清液，經(jīng)洗滌后，加入基質(zhì)進行孵育(F)。37℃ 孵育15分鐘后加入終止液，結(jié)束酶/基質(zhì)反應(G)，用磁分離免疫測定儀讀取所生成顏色的強度。 酶反應生成的顏色的強度，在測定的工作范圍內(nèi)，與標本中FT4的濃度成反比。這樣，患者標本或質(zhì)控品中FT4的濃度就可用內(nèi)插法直接從標準曲線上求得。 【試劑】 本試劑盒提供了測定200管標本所需試劑。收到試劑盒后，2~8℃貯存至標簽所示失效期。 1. 試劑組成 ⑴ FT4 抗試劑 1瓶 內(nèi)容物為含羊、牛血清蛋白的Tris緩沖液配制的熒光素標T4單克隆抗體,含0.2% w/v 疊氮鈉。10ml。 ⑵ FT4 衍生物 1瓶 內(nèi)容物為含羊、牛血清蛋白的Tris緩沖液配制的堿性磷酸酶標T3衍生物,含0.2% w/v 疊氮鈉。10ml。 ⑶ FT4 標準品 6瓶 分別為A、B、C、D、E、F，濃度范圍0-120pg/ml，各標準品濃度見各瓶上的標簽。0.2% w/v疊氮鈉和0.01％防腐劑。每瓶1ml。 ⑷ 磁分離試劑 1瓶 內(nèi)容物為共價包被著羊抗熒光素抗體的磁性微粒0.6%w/v、含牛血清蛋白的Tris緩沖液和0.2%w/v的疊氮鈉。20ml。 ⑸ 清洗濃縮液 1瓶 含有表面活性劑、防腐劑的Tris緩沖液。14.3ml。 ⑹ 基質(zhì) 2瓶 含有單磷酸酚酞(PMP)、輔酶的緩沖液。每瓶15ml。 ⑺ 終止液 1瓶 含有氫氧化鈉和螯合劑的緩沖液，PH>10，100ml。注意：有腐蝕性(見【注意事項】)。 ⑻ FT4 質(zhì)控品 1瓶 凍干人血清，0.01% w/v防腐劑和0.2%w/v的疊氮鈉。復溶后為1ml。 2. 試劑的準備和貯存 ⑴ FT4抗試劑 直接使用，2~8℃貯存至失效期，避免陽光直射。 ⑵ FT4衍生物 直接使用，2-8℃貯存至失效期，避免陽光直射。 ⑶ FT4標準品 直接使用，2~8℃貯存至失效期。 ⑷ 磁分離試劑 直接使用。用前輕輕、徹底混勻，確保磁性微粒懸浮均勻。不能使用磁力攪拌器攪拌。2~8℃貯存至失效期。不能凍存。 ⑸ 清洗濃縮液 加純化水稀釋至150ml，混勻。稀釋后2~8℃貯存至失效期。 ⑹ 基質(zhì) 直接使用，2~8℃貯存至失效期，避免陽光直射。 ⑺ 終止液 直接使用，2~8℃貯存至失效期。 ⑻ FT4質(zhì)控品 用1.0ml純化水復溶，在室溫放置30分鐘。用前輕輕搖勻。復溶后2~8℃保存2天，或分裝后于-20℃或以下可保存30天。 3. 試劑變質(zhì)跡象 ⑴ 基質(zhì)應呈淺黃色，略帶紅色亦可使用(0.15ml基質(zhì)與0.5ml終止液混勻，以水調(diào)零，A550<0.1)。 ⑵ 凍干質(zhì)控品泛潮。 ⑶ 分離試劑的磁性微粒凝集。 ⑷ FT4抗試劑、FT4衍生物、標準品或清洗濃縮液中有沉淀。 【注意事項】 本試劑僅用于體外診斷，不同批號試劑不能互換，超過有效期，請停止使用。 1. 安全防范 1. 移液時不要用嘴吸移液管。 2. 操作區(qū)內(nèi)不要吸煙、進食或化妝。 3. 用一次性吸頭移液，避免交叉污染。 2. 疊氮鈉(NaN3) 某些試劑中含疊氮鈉（NaN3），其最終濃度<0.2% w/v。疊氮鈉可與鉛、銅等金屬直接生成極毒金屬疊氮化物，處理時要用大量清水沖洗，防止疊氮化物生成。 3. 人血清 試劑盒質(zhì)控品是由人血清制備的，用免疫分析法檢測血清中乙型肝炎表面抗原和人免疫缺陷病毒(HIV)抗體呈陰性。但是鑒于沒有任何一個檢測手段可確保無HIV、乙型肝炎病毒或其它傳染因子存在，因而還是應該把該試劑看成是一種潛在的生物危險品，處理時要象對待任何一種血清或血漿標本一樣謹慎。 根據(jù)2004年發(fā)布的中華人民共和國國家標準“實驗室——生物安全通用要求”所規(guī)定的處理方法實施。 我們提請用戶注意：操作時應確保切口、磨損和其他皮膚損傷處受到充分保護，以防止自我接種或濺在粘膜上。 4. 氫氧化鈉(NaOH) 終止液中含NaOH，避免與眼、皮膚、粘膜接觸，若發(fā)生意外，先用大量清水沖洗，再求醫(yī) 【標本的采集與貯存】 1. 血清 取5.0ml靜脈血至玻璃試管中，不加添加劑，在室溫中靜置，通過離心分離血清部分，貯存。 2. 血漿 取5.0ml靜脈血至玻璃或塑料試管中，以肝素為抗凝劑，通過離心分離血漿部分，貯存。 3. 標本的貯存 血清和血漿標本2~8℃穩(wěn)定24小時。若需較長時間保存，先分裝，于-20℃可保存30天，避免反復凍融。 4. 已知干擾因素 嚴重溶血的標本，嚴重高脂血癥標本，堿性磷酸酶活性高的標本(Paget病，膽汁阻塞等)，嚴重黃疸病標本，EDTA為抗凝劑的血漿標本(EDTA能抑制酶/基質(zhì)反應)。 【實驗步驟】 1. 提供的物品 本試劑盒(產(chǎn)品號碼：12851504)內(nèi)試劑可供200支試管測定，所含組份如下： 試 劑 產(chǎn)品號碼 瓶數(shù) FT4 抗試劑 12851516 1 FT4 衍生物 12851515 1 FT4 標準品 12851517 6 磁分離試劑 75001511 1 清洗濃縮液 75001501 1 基質(zhì) 75001502 2 終止液 75001503 1 FT4質(zhì)控品 12851533 1 2. 測定前的準備 每次測定前準備下列試管，并放置在試管架上。 ◆ 各濃度標準品用試管各2支 血清、血漿、質(zhì)控品用試管各2支 ◆ 測定前將各試劑放至室溫(18~25℃)，加樣前充分混勻。 ◆ 設(shè)定好37℃±1℃水浴鍋。 ◆ 準備好磁分離免疫測定儀，(詳情請參考使用說明書)。 <  |